GB 4789.42—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验

本标准规定了食品中诺如病毒 (Norovirus)的实时荧光RT-PCR检测方法 。

本标准适用于贝类,生食蔬菜,胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品,草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测。

5.1 病毒提取

注:样品处理一般应在4°C以下的环境中进行运输。实验室接到样品后应尽快进行检测,如果暂时不能检测应将 样品保存在-80°C冰箱中,试验前解冻。样品处理和PCR反应应在单独的工作区域或房间进行。每个样品可设置2~3个平行处理。

5.1.1 软质水果和生食蔬菜

5.1.2 硬质表面食品

5.1.3 贝类

5 .2 病毒RNA提取和纯化

注:病毒 RNA 可手工提取和纯化,也可使用商品化病毒 RNA 提取纯化试剂盒。提取完成后,为延长 RNA 保存时 间可选择性加入 RNase抑制剂。操作过程中应佩戴一次性橡胶或乳胶手套,并经常更换。提取出来的 RNA 立 即进行反应,或保存在4 °C小于8h。如果长期储存建议-80 °C保存。

5.2.1 病毒裂解

5.2.2 病毒RNA提取

5.2.3 病毒RNA纯化

5.3 质量控制

5.4 实时荧光RT-PCR

手足口病诊断标准2018

六、诊断标准

结合流行病学史、临床表现和病原学检查作出诊断。

（1） 临床诊断病例

1.流行病学史  常见于学龄前儿童，婴幼儿多见。流行季节，当地托幼机构及周围人群有手足口病流行，发病前与手足口病患儿有直接或间接接触史。

2.临床表现  符合上述临床表现。极少数病例皮疹不典型，部分病例仅表现为脑炎或脑膜炎等，诊断需结合病原学或血清学检查结果。

（2） 确诊病例

在临床诊断病例基础上，具有下列之一者即可确诊。

1.肠道病毒（CV-A16、EV-A71等）特异性核酸检查阳性。

2.分离出肠道病毒，并鉴定为CV-A16、EV-A71或其他可引起手足口病的肠道病毒。

3.急性期血清相关病毒IgM抗体阳性。

4.恢复期血清相关肠道病毒的中和抗体比急性期有4倍及以上升高。

七、鉴别诊断

（一）其他儿童出疹性疾病

手足口病普通病例需与儿童出疹性疾病，如丘疹性荨麻疹、沙土皮疹、水痘、不典型麻疹、幼儿急疹、带状疱疹、风疹以及川崎病等鉴别；CV-A6或CV-A10所致大疱性皮疹需与水痘鉴别；口周出现皮疹时需与单纯疱疹鉴别。可依据病原学检查和血清学检查进行鉴别。

（二）其他病毒所致脑炎或脑膜炎

由其他病毒引起的脑炎或脑膜炎如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒等，临床表现与手足口病合并中枢神经系统损害的重症病例表现相似。对皮疹不典型者，应当结合流行病学史并尽快留取标本，进行肠道病毒尤其是EV-A71的病毒学检查，结合病原学或血清学检查结果作出诊断。

（三）脊髓灰质炎

重症病例合并急性弛缓性瘫痪时需与脊髓灰质炎鉴别，后者主要表现为双峰热，病程第2周退热前或退热过程中出现弛缓性瘫痪，病情多在热退后到达顶点，无皮疹。

（四）肺炎

重症病例可发生神经源性肺水肿，应与肺炎鉴别。肺炎患儿一般无皮疹，胸片可见肺实变病灶、肺不张及胸腔积液等，病情加重或减轻呈逐渐演变的过程。

手足口病诊疗指南（2018年版）国卫办医函〔2018〕327号

国家卫生健康委员会办公厅 2018年5月15日

感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南

各省、自治区、直辖市卫生计生委，新疆生产建设兵团卫生局： 
为进一步提高感染性疾病相关个体化医学检测，以及微阵列基因芯片技术的规范化水平，我委组织专家制定了《感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南》和《个体化医学检测微阵列基因芯片技术规范》。现印发给你们（可从国家卫生计生委网站医政医管栏目下载），请参照执行。 

国家卫生计生委办公厅 
2017年12月1日 
http://www.nhfpc.gov.cn/yzygj/s3593/201712/44aa5e433ade4cbeaad8a3a8b95a8199.shtml